31 enero 2021

Dr. Cesar Carballo : Si PHARMAMAR Fuera una BioFarmaceutica EstadoUnidense Ahora Mismo Estaría Intervenida Toda la Producción de APLIDIN Para el País .


APLIDIN La Gran Esperanza Nacional y Mundial Frente al COVID19 y Sucesivas Cepas ...
¡¡¡ Made in Spain !!! .

*.- ... Pero Desgraciadamente Estamos en España y Fijate Que Poco se Prestigia lo Que Tenemos ... ¡¡¡ Que es Oro !!! .


*.- APLIDIN ANTIVIRAL ... Trending Topic Mundial esta Semana .

*.- Los Mejores y Más Reputados Cientificos Mundiales de España , EEUU , Canada , Francia , Corea ... lo Avalan y No se Cansan de Repetir que Aplidin es Capaz de Proteger entre 80  y 100 Veces Mejor que Remdesivir .

*.- Además es Capaz de Proteger Tambien Frente a Siguientes Cepas del Virus ... Ya Que Aplidin No Permite Que los Virus Creen Mutantes  .

*.- Science ha Publicado los Resultados Obtenidos en Ratones Humanizados ... Pero Todo el Mundo Sabe que Tambien se han Realizado Ensayos Clinicos en HUMANOS de Fase I-II los Cuales en un Principio se Realizaron con 27 Pacientes y Que Ya se Comunicaron los Resultados en Octubre 2020 ... Pero a estos 27 Pacientes se les Añadieron otros 19 Pacientes Que Hacen un Total de 46 ... en Definitiva Que el Ensayo Clinico en Humanos de Fase I-II Concluyó el 28 de Diciembre 2020 . 

*.- Los Resultados Obtenidos en esta Fase I-II Logicamente Tambien Deberían  de Publicarse en Revista Cientifica de Prestigio .

*.- Se Van a Iniciar Dos Ensayos Clinicos COVID19 con Aplidin .


*.- Uno de Fase III del Cual al Realizarlo PharmaMar y esta Cotizar en Bolsa ... Nada se Puede Decir .

*.- Y la Otra Será una Fase II en Pacientes Asintomáticos ( APLICOV-URG ) que Ingresan en Urgencias ... Dicho Ensayo se Presentará esta Semana .

*.- Sera Muy Rapido y Clave ya Que Permitira Realizar una PCR Cuando Ingresa el Paciente y Otra PCR a los CUATRO DIAS y asi Saber a Ciencia Cierta en Cuanto Disminuye// Elimina la Carga Viral en los Pacientes Tratados con APLIDIN .

*.- Una Cosa es Segura ... al Ser Un Farmaco Ya Aprobado en Australia Como AntiCancerigeno y Que Por Tanto Ya ha Pasado Por Todos los Ensayos Clinicos Para ello y Que Obtuvo Dicha Aprobación  ... Estamos Ante un Fármaco Que Ya Demostró su SEGURIDAD  en CLINICA .

*.- Y Para Terminar Decir Que Si Se Cumplen los Plazos de Inicio ... a Finales de Marzo Ya Podríamos Tener los Primeros Resultados del Ensayo de Fase II en Urgencias .







APLIDIN . La Molécula Que Frena el Coronavirus . El Bicho Marino Ibicenco Que Nos Puede Salvar del COVID19 . Post By Santiago Bueno . ( Buzo-Cientifico de PharmaMar ) .


*.- Se Llama Ascidia y con él PharmaMar Prepara Ya el Súper-Antiviral .

*.- El Buzo Santiago Nos Revela los Secretos del Tesoro del que Habla con Admiración hasta 'Sciencie'... Y Sin Ayudas Públicas .


PACO REGO / Sábado 30 enero 2021 .


«Es Como Ir en Busca de un Tesoro». 

Santiago Bueno ha pasado media vida respirando como los peces en todos los mares y océanos. Buscando potenciales remedios que curen el cáncer o, como se ha conocido ahora, frenen el coronavirus. Porque además de biólogo marino, Santiago, 49 años cumplidos, es un buceador avezado. De los mejores. Un cazador de ascidias. Quédense con la palabra.

Esta semana, con los contagios por las nubes y las muertes al alza, se conocía el tesoro del que habla Santiago. A él se refería Science, la Biblia de la ciencia mundial. Firmadas por un grupo de científicos independiente, sus conclusiones abrían los principales informativos del planeta con una noticia de alcance: la un medicamento español, el Aplidin, desarrollado por la biotecnológica gallega PharmaMar, que ha logrado frenar el SARS-CoV2. Un respiro de esperanza ya que evita que el virus se multiplique en el organismo y nos enferme o nos lleve a la muerte.

Lo que pocos conocen es que detrás del prometedor anuncio hay un ser extraño de las profundidades marinas, de aspecto redondo y amorfo, parecido a un saco con agujeros; un invertebrado cubierto por una espacie de túnica bajo la cual viven protegidos varios ejemplares. La ascidia. Sí, como las que atrapa Santiago para PharmaMar, y que ha abierto un camino nuevo para el tratamiento de la mayor amenaza vírica desde la gripe española de 1918. «Uno siempre piensa, sumergido bajo toneladas de agua, que va a subir la pieza definitiva, la buena», expresa el buzo. «Es como ir en busca de un tesoro». Y encontrarlo.

Lo hizo Santiago más allá de los 40 metros de profundidad, en los fondos marinos de Ibiza, un punto del Mediterráneo donde estos animalitos más abundan. «Esta ascidia en concreto sólo se encuentra en las aguas de las Baleares y en el Atlántico Este, las Azores, Portugal, el Canal de La Mancha...», sitúa el biólogo, quien además se encarga de la colección de organismos marinos de la farmacéutica -más de 250.000 animales y plantas-, la mayor del mundo.

Y ahí, como un tesoro en frío, permanece nuestra protagonista, la Aplidium albicans (denominación científica de esta ascidia), congelada y guardada como una joya eterna a la espera de futuras investigaciones. Apenas un par de centímetros de tamaño en cuyo interior late la fórmula mágica de un potente antiviral, la plitidepsina, el principio activo del revolucionario fármaco español que ha merecido las páginas de Science, haciéndole ver al planeta que en esta guerra no todo está perdido. Que hay salida y puede que esté cerca.

Incluso la televisión china, por lo general reacia a dar noticias de Occidente, ha destacado el hallazgo Made in Spain en sus informativos.

El aval internacional comenzó a fraguarse en febrero del año pasado, de la mano de un plantel de científicos de primer nivel mundial que se pusieron a investigar en ratones y células humanas los efectos de la molécula revelación.

Los experimentos -realizados por Kris White, microbiólogo de la Escuela de Medicina del Hospital Monte Sinaí de Nueva York, Adolfo García-Sastre y Thomas Zwaka, del mismo centro; Kevan Shokat y Nevan Krogan, en el Instituto de Biociencias Cuantitativas de la Universidad de California, y Marco Vignuzzi en el Instituto Pasteur de París y PharmaMar- demostraron que el fármaco (desarrollado en principio como un antitumoral) frenaba la multiplicación del virus y rebajaba un 99% la carga viral en el pulmón, su objetivo.

Santiago Bueno, biólogo marino y buzo de PharmaMar, con una de las ascidias que ha capturado. De este animal invertebrado se ha obtenido el fármaco más potente contra el coronavirus.

Santiago Bueno, biólogo marino y buzo de PharmaMar, con una de las ascidias que ha capturado. De este animal invertebrado se ha obtenido el fármaco más potente contra el coronavirus.ALBERTO DI LOLLI

«Es el antiviral más potente que hemos encontrado, tengo esperanzas», dice desde su laboratorio en Nueva York Adolfo García-Sastre, virólogo burgalés, uno de los científicos que desde sus inicios ha trabajado en el ensayo. Es 100 veces más potente que el Remdisivir de la farmacéutica estadounidense Gilead, el único fármaco autorizado contra el coronavirus.

El secreto está en la plitidepsina de la ascidia, que bloquea la proteína eEF1A, la diana terapéutica del Aplidin, presente en las células humanas y que el SARS-CoV2 utiliza como estrategia para reproducirse indefinidamente y colonizar los pulmones, su órgano predilecto.

García-Sastre confirma a Crónica que comenzaron a investigar en febrero del año pasado, poco antes de que la pandemia diera su peor cara. «Entonces aún no disponíamos de modelos de ratón para estudiar el SAR-CoV-2 ni tampoco sabíamos que la eEF1A era una posible diana terapéutica», admite el virólogo, que añade que han utilizado "ratones y células humanas" en el estudio.

-Entre un animal de laboratorio y un ser humano hay sin embargo un salto abismal. ¿Qué esperan realmente de este fármaco?

-Completamente de acuerdo. Por eso es tan importante concluir los ensayos clínicos cuanto antes para saber si funciona o no.

Poco antes de que esto ocurriera, en el primer momento que se conoció la propagación del coronavirus, la molécula marina había tenido otros padrinos científicos que adelantaron lo que iba a venir. De hecho, PharmaMar puso su fármaco en manos de los científicos del Centro Nacional de Biotecnología (CNB) para que estudiaran sus efectos contra este coronavirus.

El equipo que dirige Luis Enjuanes, inmerso hasta hoy en el desarrollo de una vacuna que podría estar lista a finales del presente año, consiguió demostrar en un ensayo in vitro que el Aplidin logra frenar la multiplicación del coronavirus HcoV-229E, un tipo de virus de la familia del covid-19 y que tiene un mecanismo de multiplicación y propagación muy similares. Estos resultados, según PharmaMar, confirmaron la hipótesis de que la diana terapéutica del Aplidin (plitidepsina), la eEF1A, es clave para la multiplicación y propagación del virus.

El camino recorrido hasta aquí no hay sido fácil. Desde que logró aislar y sintetizar su joya química, PharmaMar ha tenido que remar contra vientos y mareas. Nada nuevo, sin embargo, para una farmacéutica que desde sus inicios vive íntegramente del mar, del que extrae las moléculas principales de todos sus medicamentos. El último, el Aplidin, fruto de la ascidia, Europa lo rechazó dos veces.

La primera en diciembre de 2017. Cuando el fármaco, en principio desarrollado para el tratamiento del mieloma múltiple, un tipo de cáncer que ataca la médula ósea y cuyo uso está aprobado en Australia, fue descartado para su comercialización. No sería el último golpe.

El buzo Santiago en una de sus inmersiones. La ascidia 'Aplidium albicans' vive a 40 metros de profundidad y sólo e encuentra en las aguas de Baleares y en el Atlántico Este.

El buzo Santiago en una de sus inmersiones. La ascidia 'Aplidium albicans' vive a 40 metros de profundidad y sólo e encuentra en las aguas de Baleares y en el Atlántico Este.PHARMAMAR

En 2018, y como consecuencia de la confirmación por parte de la Agencia Europea de Medicamentos de la negativa sobre la aprobación de comercialización de Aplidin en Europa, PharmaMar decidió cancelar el desarrollo del fármaco y dar de baja la totalidad de la inversión realizada hasta la fecha: 108 millones de euros de coste y dos millones de amortización acumulada.

Tras presentar una demanda el 1 de octubre de ese año ante el Tribunal General de la Unión Europea solicitando la anulación (1 de octubre de ese año), dos años después (el 28 de octubre de 2020) los jueces le dieron la razón a la compañía.

Ahora, con el coronavirus, PharmaMar desempolva el Aplidin, de cuya reconversión en antiviral contra el covid espera obtener buenos resultados económicos.

El tercer golpe, y quizás el más doloroso, lo recibiría en su propia casa. Tras dispararse en la Bolsa, el «Que inventen ellos» de Unamuno ponía más palos en las ruedas. El mercado confía en PharmaMar, Pedro Sánchez no. Ni siquiera el Ministerio de Ciencia e Innovación pilotado por Pedro Duque. El astronauta, que lleva desaparecido desde que la pandemia explotó, parece vivir en otros mundos.

«No sólo no nos ayudan, sino que nos han perjudicado», clamaba el presidente de PharmaMAR, José María Fernández de Sousa, durante un foro con representantes de la Universidad de Navarra, hace apenas dos meses. Decía más: «A otras empresas como Moderna [que en ese momento estaba desarrollando una de la vacunas contra el coronavirus] es han dado muchísimo dinero. Así es cómo otros gobiernos [en este caso el de EEUU] ayudan a sus empresas», lamentaba Sousa en Economía Digital Galicia, mientras en España «nos han denegado todas las ayudas que hemos pedido». Y eso que es, sin duda, la apuesta española -tal vez la única- más importante para luchar contra el virus. Pero sorprendentemente, el Gobierno la ha ignorado.

Sousa se refería a dos de los tres proyectos relacionados con el Aplidin que iba a poner en marcha, pero se topó con la negativa de la administración. «Uno de ellos era para producir la plitididepsina [Aplidin] por fermentación y nos lo denegaron», al igual que la iniciativa para poder administrar el Aplidin por vía oral en lugar de hacerlo como inyectable. «Nosotros, ayudas cero».Otra fuente: «No se entiende que nos traten de esa manera. Nuestro trabajo es aportar soluciones, somos científicos, no politicos. Nos tienen en el punto de mira...».

Mientras aquí seguimos despreciando talento y proyectos innovadores, la estadounidense Pfizer, que recibió 1.950 millones de dólares del Gobierno y puso en el mercado la primera vacuna anti covid de la historia, ha anunciado que ya tiene en cartera la fabricación masiva de un fármaco para el tratamiento del coronavirus.

Lo explica Fernández de Sousa: «Falta financiación... Desde hace años las ayudas a la investigación son préstamos. Es una aberración. En qué cabeza cabe que eso sean ayudas», denunciaba el timonel de la biotecnológica, que desde su nacimiento, hace más de tres décadas, ha hecho de los océanos y mares su particular farmacia. En ella confió desde el principio una socia incondicional: la difunta Rosalía Mera, primera esposa de Amancio Ortega.

A través del grupo Rosp Corunna, Mera invertía en la farmacéutica gallega, a pesar de que llegó a costarle algún disgusto con sus asesores, según recoge finanzas.com. Actualmente es Sandra Ortega, hija de la fallecida y del magnate de Inditex, la que mantiene la apuesta que hizo su madre tras la salida a bolsa de la textil. El holding empresarial que dirige, Rosp Corunna, es, según el digital, el segundo accionista de PharmaMar, con un 5% de capital.

Cada año, los buceadores de PharmaMar realizan al menos seis campañas de recogida en las profundidades. Lo hacen con la misma idea con la que Jacques Cousteau, el gran divulgador del mundo subacuático marino, afrontaba sus exploraciones. «Yo le hago el amor al mar, otros lo atacan», dijo. Palabras que bien podría firmar Santiago Bueno. Él, como el explorador francés, aprovecha la entrevista con Crónica para denunciar lo que está pasando bajo las aguas, oculto a los ojos de la mayoría.

«Lo que ves ahí abajo es un planeta sucio, lleno de residuos por todas partes. El mar hay que tratarlo con cariño y mucho respeto. Pero al paso que vamos, las ascidias no podrán sobrevivir. Como animal filtrador que es, necesita aguas limpias que no obstruyan sus sifones y dificulten su metabolismo. De lo contrario, terminarán extinguiéndose. ¿Alguien se imagina qué pasaría? ¿Podríamos, por ejemplo, combatir el coronavirus o el cáncer?».

Doce ejemplares esperan su turno congelados en una nevera a las afueras de Madrid.

Los 'Chorros Marinos' .

Conocidas como "chorros marinos", debido a que se alimentan succionando agua para expulsarla una vez que han retenido los alimentos, las ascidias permanecen fijas en rocas y conchas. Y aunque puedan parecer un vegetal, realmente, son animales invertebrados, como las esponjas y los corales. Cuando se desplazan, nadan libres formando parte del plancton. Se conocen alrededor de 2.300 especies, casi todas son hermafroditas. Las que tienen reproducción asexual (predominante en especies coloniales) liberan los gametos al agua, produciéndose la fertilización externa.

Dependiendo de la especie y de su hábitat, pueden variar entre 0,5 y 10 cm de longitud. Algunas pueden llegar a alcanzar hasta 40 centímetros. 

La mayoría de estos animales habita todos los mares y océanos del planeta, excepto la 'Aplidium albicans', de la que se extrae el principio activo contra el Covid-19, exclusiva del Mediterráneo, especialmente de la zona balear donde más abunda, y del Atlántico Este. 

Se encuentran en una gran variedad de colores (blancas, rosas...) y formas (redondas, cilíndricas...). Suelen vivir a 40 metros de profundidad y son de tres tipos: solitarias, sociales y coloniales. Estas últimas viven conjuntamente y están envueltas por una túnica blanquecina perforada (De ahí que se conozcan como animales tunicados). Son los orificios de los sifones inhalantes, por los que fitran el agua y se alimentan.

Aplidin Could Be The Silver Bullet Against COVID19 and Successive Strains ... It Comes From The Most Beautiful Place on The Planet ... Islands of Ibiza and Formentera ( Es Vedra / Tagomago ) . Aemps Vas a Quedar Fatal Como Se Te Adelanten Otras Agencias de Otros Países ... . Aplidin Anti-COVID Ya No Tiene Fronteras : Así Pronuncian los Chinos Pharmamar y PLITIDEPSIN .

Aplidin . Hace 192 Días ( Julio 2020 ) , Luis Enjuanes Ya Comento de lo Que Era Capaz de Conseguir Dicho Fármaco en Casos Terminales . Link: https://youtu.be/ivUosNBArBE
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Aplidin Podría Ser la Bala de Plata Contra el COVID19 y las Sucesivas Cepas ... Proviene del Lugar Más Hermoso del Planeta ... Islas de Ibiza y Formentera (Es Vedra / Tagomago).

La Plitidepsina se Halló en un Animal Marino en Eivissa . El Fármaco Contra la Covid19 , Fruto de 30 Años de Investigación .

Cristina Sáez . Barcelona 31 Enero 2021 .

Como casi todas las historias, la del fármaco español Aplidin comienza por azar y tiene ingredientes de pasión, tesón y paciencia. En octubre de 1988 biólogos del Centre d’Estudis Avançats de Blanes (CEAB-CSIC) zarparon en el García del Cid , un buque de investigación oceanográfica del CSIC, a hacer un muestreo por las islas Columbretes y Baleares. El objetivo era recoger organismos para estudiar cómo interactuaban químicamente en los fondos marinos.

La expedición formaba parte de un proyecto dirigido por la investigadora María Jesús Uriz y estaba financiada por la compañía farmacéutica española PharmaMar. En aquellos años comenzaba a extenderse la idea de la farmacia del mar, los océanos vistos como una fuente de recursos por explorar y explotar. Y de la misma manera que se rastreaba el Amazonas en busca de plantas u hongos con sustancias químicas que pudieran servir para elaborar nuevos fármacos, se empezaba a recurrir al mar para dar con moléculas que también pudieran tener potencial terapéutico.

Actividad Antiviral .


El compuesto hallado en el Mediterráneo es más activo contra el virus que el remdesivir .


Para eso PharmaMar necesitaba la ayuda de biólogos marinos que no solo fueran capaces de recoger muestras de organismos marinos, sino que también pudieran identificarlos para que la compañía luego pudiera investigar si alguna de las sustancias que secretaban podía tener actividad antibacteriana, antiviral, antitumoral...


Así, cada vez que el García del Cid arribaba a un lugar ecológicamente interesante, el equipo de buzos del CEAB bajaba a tomar muestras. En una de esas, a 52 metros de profundidad, cerca de Eivissa, sobre unas cuerdas sumergidas en una comunidad coralígena, se toparon con abundantes colonias de un pequeño organismo filtrador, una ascidia, parecido a una esponja, de color blanquecino y blando, como pequeñas bolas de pocos centímetros de diámetro.

El destino quiso que en aquella expedición estuviera Xavier Turon, un investigador que, pese a su juventud entonces, era uno de los pocos especialistas mundiales en ascidias. Fue él quien tomó las muestras y, al regresar a Blanes, se las llevó al laboratorio, donde las estudió meticulosamente, observándolas al microscopio para buscar las características morfológicas, hasta que logró identificarlas.

“Se trataba de Aplidium albicans , una especie que ya estaba descrita, que es escasa en el planeta y de la que no se sabía que vivía en nuestro litoral”, recuerda Turon, que entonces no podía ni imaginar que aquel modesto organismo acabaría teniendo un papel destacado en la lucha contra una pandemia de coronavirus.

PharmaMar realizó tests preliminares a los organismos recolectados en aquel muestreo y halló que, de los cientos de especies que les había proporcionado el equipo del CEAB, solo aquella ascidia tenía una actividad interesante.

“Los análisis de PharmaMar mostraron que aquel modesto invertebrado tenía una sustancia química con propiedades antitumorales y antivirales”, explica Turon en referencia a la plitidepsina, el compuesto químico que es la base del fármaco Aplidin y que un estudio publicado en Science esta semana ha demostrado que tiene una eficacia contra el nuevo coronavirus 27,5 veces superior al antiviral remdesivir.

Como ocurre con las esponjas, los bivalvos y otros organismos invertebrados, las ascidias no se pueden mover y para evitar ser comidas por depredadores, luchar por mantener un espacio o incluso dar pistas a sus larvas de dónde se pueden ubicar, secretan sustancias. “Algunas tienen capacidad de inhibir patógenos y pueden usarse como moléculas terapéuticas”, explica Turon.

En el Caso de la Plitidepsina y el Coronavirus, Esta No Ataca Directamente al Virus, sino que le Impide Replicarse en el Interior de las Células Humanas, Inhibiendo una Proteína que el Virus Necesita para Reproducirse.


“La Historia de este Fármaco –comentan Turon y Enrique Macpherson, otro de los Investigadores del CEAB especialista en invertebrados marinos– pone de relieve la importancia de la investigación básica. Sin el trabajo de identificación y estudio de la biodiversidad que realizamos los taxónomos, no habría después aplicaciones terapéuticas como esta. 


Somos el Primer Eslabón de la Cadena”.

30 enero 2021

APLIDIN Es Un Posible """ Tratamiento AntiViral de Amplio Espectro """ . Y Que Incluso Podria Valorarse Combinaciones con Dexametasona o con Remdesivir . By Dr. Sherman Fung .

新冠特效藥物Aplidin近日有突破性發展 

Dr. Sherman Fung de la Universidad de Oxford . Graduado en Honores de Primera Clase del Imperial College, Beca GlaxoSmithCry Para el Centro de Investigación de Ciencias Moleculares de la Universidad de Oxford Para Estudios Farmacéuticos, se Graduó en la Universidad de Oxford en 1993 con un Doctorado. 

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El autor cree que se puede combinar con Remdesivir y Dexamethasone. Actualmente, los ensayos clínicos de fase II / III están avanzando.

Al mismo tiempo, también anunciaron en bioRxiv el efecto inhibidor sobre la cepa variante 501Y.V1 encontrada en el Reino Unido (p5), confirmando que los fármacos dirigidos al huésped no son fáciles de desarrollar resistencia al tratamiento y pueden tener ciertas ventajas .

Name

Dr Sherman Kwok-Wing Fung

Qualifications

BSc (1st Class Hons) Imperial College London

DPhil University of Oxford

CSci CChem, FRSC

Overseas Fellow of Royal Society of Medicine (FRSM)

Senior Member of Japanese Society of Investigative Dermatology

Senior Member of Chinese Pharmaceutical Association

Areas of expertise

Manufacturing

Marketing and Business Development

Science, Engineering and Technology

Strategy and Policy

Services offered

Business Development

Project Management

Products Development

Fundraising Management

OEM/ODM and Logistics Management

R&D Management

Markets served

Devices

Healthcare

Skincare

Herbal Medicine

Geographic regions served

Mainland China (inc Hong Kong)

S E Asia

Japan

Covid19 . Agencia Europea de Medicamentos ( EMA ) Da Luz Verde a la Vacuna de AstraZeneca . Post By Celtia .

 


El Escaso 66% de Eficacia de Johnson & Johnson Dispara la Cotización de Moderna . Post By Celtia .

 


COVID19 / Aplidin . El Posible Tratamiento de Pharmamar es Cabecera Prácticamente en Todos los Medios de Comunicación del Planeta . ¿ Que País y Que Agencia Será la Primera En Autorizar el Inicio de la Definitiva Fase III ? .

 By NBCNews ( EEUU ) .  APLIDIN . THE SILVER BULLET  ... ? .




29 enero 2021

APLIDIN y su Eficacia Frente a la Cepa Británica ( B.1.1.7 ) Host-DirectedTtherapies Against Early-Lineage SARS-CoV-2 Retain Efficacy Against B.1.1.7 Variant .

 Las Terapias Dirigidas Por el Huésped Contra el SARS-CoV-2 de linaje Temprano Conservan la Eficacia Contra la Variante B.1.1.7 .

Ann-Kathrin Reuschl , 1, Lucy G. Thorne , 1, Lorena Zuliani-Alvarez , 2, 3, 4, 5, Mehdi Bouhaddou , 2, 3, 4, 5, Kirsten Obernier , 2, 3, 4 , Margaret Soucheray , 2, 3, 4, Jane Turner , Jacqueline M. Fabius , 2, Gina T. Nguyen , 2, Danielle L. Swaney , 2,3, 4, Romel Rosales , 6, Kris M. White , 6, Pablo Avilés , Ilsa T. Kirby , 2, 3, 5, James E. Melnyk , 2, 3, 5, Ying Shi , 2, 3, 5, Ziyang Zhang , 2, 3, 5, Kevan M. Shokat , 2, 3, 5, Adolfo García-Sastre , 6, 7, 10, 11, # Clare Jolly , 1, Gregory J. Towers , 1, # y Nevan J. Krogan 2, 3, 4, 5, 6, #

Introducción

El síndrome respiratorio agudo severo coronavirus 2 (SARS-CoV-2), el agente causante de la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19), se ha extendido por todo el mundo causando millones de muertes y trastornos sociales y económicos masivos. En septiembre de 2020, se detectó una nueva variante de SARS-CoV-2 en el Reino Unido (Reino Unido), conocida como linaje B.1.1.7. Esta variante se ha extendido rápidamente desde noviembre de 2020 en todo el Reino Unido y ahora comprende hasta el 40% de los casos nuevos de COVID-19 en el sureste de Inglaterra (Public Health England, tercer informe técnico). Fundamentalmente, B.1.1.7 también se ha detectado en numerosos países de todo el mundo, incluidos los Estados Unidos, Europa y Canadá. Número de infecciones B.1.1.7 en rápido aumento y B.1.1.

La secuenciación de la variante B.1.1.7 reveló 23 mutaciones (  ); 17 mutaciones que codifican proteínas (14 mutaciones no sinónimas y 3 deleciones) y 6 mutaciones sinónimas (Figura 1). La mayoría de las mutaciones codificadoras de proteínas (8) se observaron dentro de la proteína Spike viral, que facilita la entrada viral a través de su interacción con el receptor ACE2 humano. Informes recientes han sugerido que los cambios en Spike, especialmente en el dominio de unión al receptor (RBD), encontrados en nuevas variantes de SARS-CoV-2 pueden alterar la sensibilidad de neutralización de anticuerpos y posiblemente la eficacia de la vacuna (  ;  ), aunque esto no parece ser cierto para la mutación N501Y de Spike RBD de la variante  (  ; ). Las otras mutaciones no sinónimas se encuentran en la proteína Nsp3 (3), Nsp6 (1), Orf8 (3) y N (2). El impacto de estas mutaciones en la replicación, transmisión y patogénesis viral aún no se comprende bien. Es fundamental investigar el impacto de estas mutaciones en el ciclo de vida viral y evaluar la eficacia de los tratamientos antivirales candidatos previamente identificados para COVID-19 en esta nueva variante del SARS-CoV-2.

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Mutaciones que codifican proteínas en la variante del virus SARS-CoV-2 B.1.1.7.

A) Mapa del genoma del SARS-CoV-2 (NC_045512.2) que representa marcos de lectura abiertos (flechas violetas oscuras) y proteínas resultantes de la escisión del polipéptido ORF1ab en proteínas no estructurales (violeta claro). Se anotan 17 mutaciones que codifican proteínas (arriba) que incluyen 14 mutaciones no sinónimas y 3 deleciones que abarcan 5 proteínas virales. B) Expansión de la región genómica de la espiga a la proteína N con fines de visualización.

Actualmente, solo las intervenciones inmunosupresoras como la dexametasona han tenido éxito en la reducción de la mortalidad en casos graves de COVID-19 (  ). Sigue existiendo una necesidad urgente de probar y desarrollar nuevas intervenciones terapéuticas para el tratamiento clínico que se dirijan tanto a la replicación viral como a la inmunopatología asociada con un mal pronóstico. Las terapias dirigidas al huésped ofrecen ventajas sobre las que se dirigen directamente al virus, ya que los genes del huésped poseen una menor propensión a mutar y presentan una barrera más alta para la adaptación viral que implica interacciones con cofactores esenciales del huésped. Además, las dianas de hospedadores que pueden administrarse medicamentos a menudo juegan un papel en otras enfermedades, brindando la oportunidad de reutilizar medicamentos aprobados por la FDA y acelerar los plazos de desarrollo de medicamentos.

Anteriormente, nosotros y otros hemos identificado varios factores del hospedador que interactúan directamente con las proteínas del SARS-CoV-2 (  ;  ), o se ven afectados durante el curso de la infección viral. infección (  ). Muchos de estos factores del hospedador están dirigidos por medicamentos aprobados por la FDA, nuevos medicamentos en investigación (IND) o compuestos preclínicos, y han demostrado fuertes efectos antivirales. Por ejemplo, descubrimos que el factor de traducción eucariota eIF4H interactúa con el SARS-CoV-2 Nsp9 e identificamos inhibidores de la maquinaria de traducción eucariota como potentes antivirales contra el SARS-CoV-2, incluida la zotatafina (inhibidor de eIF4A) y la ternatina-4 (inhibidor de eEF1A), un derivado molecular de plitidepsina (aplidina) ( ). La plitidepsina, otro inhibidor de eEF1A aprobado clínicamente en algunos países para tratar el mieloma múltiple ( ), poseía una potente actividad antiviral en varias líneas celulares, células primarias y modelos de ratón ( ). Además, la inhibición farmacológica de la señalización de p38 utilizando ralimetinib y otros inhibidores de p38 demostró una fuerte actividad antiviral, consistente con un marcado aumento en la actividad de la p38-MAP quinasa durante la infección por SARS-CoV-2 (). Aquí, mostramos que plitidepsina, ralimetinib y remdesivir (un análogo de nucleósido antivírico de amplio espectro ampliamente utilizado aprobado para su uso en varios países para el tratamiento de COVID-19) poseen eficacia antiviral contra la variante del virus B.1.1.7.

Resultados / Discusión

Primero tratamos las células Caco-2 del epitelio intestinal con un rango de concentraciones de plitidepsina, ralimetinib o remdesivir antes de la infección por el SARS-CoV-2 de linaje temprano BetaCoV / Australia / VIC01 / 2020 (VIC) o el B.1.1.7 variante (SARS-CoV-2 England / ATACCC 174/2020 aislado) durante 24 horas. La plitidepsina suprimió de forma potente la replicación viral de ambas cepas de SARS-CoV-2 en el rango nanomolar, medida mediante células positivas a la proteína nucleocápside intracelular (% de células N +) mediante citometría de flujo (Figura 2 A) así como la replicación del ARN viral medida por acumulación de ARN E genómico y subgenómico por RT-qPCR (Figura 2 B). También se observó inhibición de la replicación viral con ralimetinib, inhibidor de la dirección p38, con efectos antivirales que se manifiestan a concentraciones de fármaco μM (Figura 2 D y yE).mi). No observamos citotoxicidad en el rango de concentraciones utilizadas para cada inhibidor mediante el ensayo MTT (Figura 2 C y y F).F). Remdesivir, un inhibidor de la polimerasa (Kovic, 2020), se usó como control positivo y también inhibió la replicación de ambos virus de una manera dependiente de la dosis en el rango μM (Figura 2H), como se observó en otros lugares (  ), sin citotoxicidad observada (Figura 2 I). Sorprendentemente, la plitidepsina fue eficaz contra los linajes iniciales y más recientes del SARS-CoV-2 en concentraciones de un orden de magnitud inferior al remdesivir.

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Eficacia antiviral contra SARS-CoV-2 de linaje temprano y variante B.1.1.7 en células epiteliales intestinales humanas Caco-2.

BetaCoV / Australia / VIC01 / 2020 (VIC) o SARS-CoV-2 B.1.1.7 (SARS CoV 2 England / ATACCC 174/2020) replicación después del tratamiento con dosis crecientes de plitidepsina inhibidor de eEF1A, ralimetinib inhibidor de p38 o viral inhibidor de la replicación remdesivir. A , D , G ) Los niveles de infección en presencia de plitidepsina (A), ralimetinib (D) o remdesivir (G) se midieron mediante tinción intracelular para la proteína de la nucleocápsida (N +) del SARS-CoV-2 a las 24 h después de la infección. B , E , H ) Se muestra la replicación de ARN E genómico y subgenómico de SARS-CoV-2 por μg de ARN total medido por qRT-PCR. C , F , yo) La viabilidad celular en ausencia de infección después de la exposición a las concentraciones de inhibidor indicadas se muestra en relación con los controles tratados con DMSO. Las líneas discontinuas indican la replicación viral en presencia de control de vehículo DMSO. Media +/− SEM (n = 3).

Para confirmar que ambos fármacos dirigidos al huésped retuvieron actividades en células competentes de detección innata, probamos su efecto sobre la infección por SARS-CoV-2 en células epiteliales de pulmón humano Calu-3. Esta línea celular es altamente permisible para la infección por SARS-CoV-2, mientras genera una fuerte respuesta inmune innata inflamatoria (  ) similar a la observada en las células primarias de las vías respiratorias humanas (Ravindra et al. 2020). Probamos la concentración no tóxica más alta (> 75% de viabilidad celular) de cada fármaco (Figura 3 A,RE,re,GRAMO),GRAMO), Plitidepsina 6 nM, ralimetinib 6,7 μM y remdesivir 1,1 μM, contra ambos linajes SARS-CoV-2. De forma similar a lo que observamos en las células Caco-2, la plitidepsina retuvo los efectos antivirales más potentes contra B.1.1.7 y BetaCoV / Australia / VIC01 / 2020 (VIC) a concentración nM (Figura 3 B y y C),C), pero los tres fármacos suprimieron eficazmente la replicación de ambos virus (Figura 3 B,,CC,,MImi,,FF,, HH,,YOyo).

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Eficacia antiviral contra SARS-CoV-2 de linaje temprano y variante B.1.1.7 en células epiteliales pulmonares humanas Calu-3.

Replicación viral en células epiteliales de pulmón humano Calu-3 de SARS-CoV-2 BetaCoV / Australia / VIC01 / 2020 (VIC) o SARS-CoV-2 B.1.1.7 (SARS CoV 2 England / ATACCC 174/2020) después del tratamiento con dosis crecientes de plitidepsina inhibidor de eEF1A, ralimetinib inhibidor de p38 o remdesivir inhibidor de la replicación viral (n = 3). A , D , G ) La viabilidad celular en ausencia de infección después de la exposición a concentraciones de inhibidor indicadas se muestra en relación con los controles tratados con DMSO. B , E , H) Los niveles de infección después del tratamiento con plitidepsina (6 nM) (B), ralimetinib (6,7 μM) (E) o remdesivir (1,1 μM) (H) se midieron mediante tinción intracelular para la proteína de la nucleocápsida (N +) del SARS-CoV-2 en 24 horas después de la infección. El porcentaje de infección se muestra en relación con los controles tratados con DMSO (n = 2–3). C , F , I ) Se muestra la replicación de ARN E genómico y subgenómico del SARS-CoV-2 por μg de ARN total medido por qRT-PCR. Las líneas discontinuas indican la replicación viral en presencia de control de vehículo DMSO. Media +/− SEM (n = 3).

En conjunto, los fármacos dirigidos por el huésped plitidepsina y ralimetinib, así como el remdesivir, poseen eficacia antiviral tanto contra el linaje temprano (VIC) del SARS-CoV-2 como contra la variante del virus B.1.1.7. La plitidepsina es un tratamiento clínico aprobado para el mieloma múltiple (  ) y actualmente se encuentra en un ensayo clínico de fase 2 para el tratamiento de COVID-19 en España ( https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT04382066 ) , debido a sus propiedades antivirales en cultivos celulares y modelos animales de enfermedad. En consonancia con los datos anteriores, hemos demostrado recientemente que plitidepsin es 27,5 veces más potente contra SARS-CoV-2 de principios del linaje de remdesivir y ejerce actividad antiviral con un IC 50 de aproximadamente 1 nM ( ). La plitidepsina es un antagonista de eEF1A, que forma parte del complejo de elongación de traducción eucariota 1 y comúnmente utilizado por los virus de ARN para la traducción de ARNm (  ). Por lo tanto, el tratamiento con plitidepsina puede interferir con éxito con la replicación viral y podría extenderse a otras infecciones virales como un antivírico de acción amplia, lo que sería consistente con informes anteriores que sugieren que los virus son más susceptibles a los reguladores de la proteostasis que sus huéspedes celulares (  ).

Ralimetinib, un inhibidor de la proteína quinasa activada por mitógenos p38, se desarrolló inicialmente para el tratamiento de pacientes con cáncer avanzado (  ;  ). p38 está involucrado en diferentes procesos celulares que incluyen la traducción de proteínas, el ciclo celular, la inflamación y la muerte celular (  ). Anteriormente informamos que p38-MAPK está fuertemente regulada durante la infección por SARS-CoV-2 y los medicamentos dirigidos a estas vías mostraron actividad antiviral in vitro., lo que sugiere que el SARS-CoV-2 se basa en la activación de p38 para la replicación viral. Se han informado hallazgos similares para SARS-CoV y HCoV-229E, donde se observa la activación de p38 durante la infección viral y la inhibición de esta vía puede limitar la replicación viral (  ;  ). Además, hemos demostrado que el bloqueo de la activación de p38 reduce significativamente la expresión de citocinas (  ), lo que sugiere que apuntar a esta vía puede ser beneficioso en casos graves de COVID-19, donde la desregulación inmune y el daño tisular se asocian con un mal pronóstico de la enfermedad .

Si bien las mutaciones en la proteína Spike en la variante B.1.1.7 podrían contribuir potencialmente a una mayor transmisibilidad, las mutaciones en otras proteínas virales también podrían estar influyendo. Será interesante determinar si estas mutaciones alteran el panorama de interacción proteína-proteína humana SARS-CoV-2-proteína humana y cómo lo hacen (  ;  ). Además, el análisis de los cambios celulares en el huésped durante la infección con los diferentes linajes, incluida la monitorización de las alteraciones en las redes de señalización a través de modificaciones postraduccionales (es decir, fosforilación (  ) y ubiquitinación), así como las dependencias genéticas del huésped (  ;  ; ), pueden ayudar a comprender estas y futuras variantes.

Este estudio se basa en nuestra caracterización previa de los medicamentos dirigidos al huésped como antivirales para la infección por SARS-CoV-2 (  ;  ;  ; ) y demostrar las ventajas de reutilizar medicamentos que están clínicamente aprobados con farmacocinética y perfiles de seguridad conocidos, ya que pueden pasar rápidamente a ensayos clínicos. Además, nuestros datos fomentan el desarrollo preclínico y clínico continuo de terapias antivirales dirigidas al huésped para COVID-19, ya que dirigirse a los factores esenciales del huésped necesarios para la replicación viral proporciona una estrategia para mantener la eficacia contra las variantes emergentes del SARS-CoV-2. Es importante destacar que, dado que estos medicamentos inhiben los procesos celulares comúnmente empleados por diferentes virus para asegurar la infección, estas y otras terapias dirigidas al huésped podrían usarse para responder rápidamente a futuros brotes virales. 

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